二級生物安全柜是目前應用為廣泛的柜型。按照NSF49的中的規定,二級生物安全柜依照入口氣流風速、排氣方式和循環方式可分為4個級別:A1型,A2型(原B3型),B1型和B2型。所有的二級生物安全柜都可提供工作人員、環境和產品的保護。
A1型安全柜前窗氣流速度小量或檢測平均值應至少為0.38m/s。70%氣體通過HEPA過濾器再循環至工作區,30%的氣體通過排氣口過濾排除。
A2型安全柜前窗氣流速度小量或檢測平均值應至少為0.5m/s。70%氣體通過HEPA過濾器再循環至工作區,30%的氣體通過排氣口過濾排除。
二級B型生物安全柜均為連接排氣系統的安全柜。連接安全柜排氣導管的風機連接緊急供應電源,目的在斷電下仍可保持安全柜負壓,以免危險氣體泄漏如實驗室。其前窗氣流速度小量或檢測平均值應至少為0.5m/s(100fpm)。B1型70%氣體通過排氣口HEPA過濾器排除,30%的氣體通過供氣口HEPA過濾器再循環至工作區。B2型為百分之百全排型安全柜,無內部循環氣流,可同時提供生物性和化學性的安全控制。
三級生物安全柜是為4級實驗室生物安全等級而設計的,柜體完全氣密,工作人員通過連接在柜體的手套進行操作,俗稱手套箱(Golve box),試驗品通過雙門的傳遞箱進出安全柜以確保不受污染,適用于高風險的生物試驗。